油脂 中脂肪酸含量測定

  ――― 氣相色譜法測定大豆油中脂肪酸成分 

    油脂是食品加工中重要的原料和輔料，也是食品的重要組分和營養成分。必需脂肪酸是維持人體生理活動的必要條件，人體所必需的脂肪酸一般取自食品用油，即食用油脂。氣象色譜法測定油脂脂肪酸組分是現在最常用的方法，也是一些相關標準（如：GB/T17377）規定應用的檢測方法。

    甲酯化是分析動植物油脂脂肪酸成分的常用的前處理方法，也是常用的標準方法（GB/T 17376-1998）。 

二、原理

    本實驗甲酯化方法采用國標--GB/T 17376-1998，甘油酯皂化后，釋出的脂肪酸在三氟化硼存在下進行酯化，萃取得到脂肪酸甲酯用于氣象色譜分析。

    樣品中的脂肪酸（甘油酯）經過適當的前處理（甲酯化）后，進樣，樣品在汽化室被汽化，在一定的溫度下，汽化的樣品隨載氣通過色譜柱，由于樣品中組分與固定相間相互用的強弱不同而被逐一分離，分離后的組分，到達檢測器（detceter）時經檢測口的相應處理（如FID的火焰離子化），產生可檢測的信號。根據色譜峰的保留時間定性，歸一法確定不同脂肪酸的百分含量。 

三、儀器與試劑

（一）儀器

    1．氣相色譜儀：具氫火焰離子化檢測器（FID）。

    2．恒溫水浴鍋

    3．移液管

    4．膠頭滴管

    5．小圓底燒瓶

    6．冷凝管

    7. 樣品瓶

（二）試劑

    1.正己烷：分析純，沸程60～90℃或30～60℃，重蒸。

    2.氫氧化鉀甲醇溶液

    3.三氟化硼甲醇溶液

    4.飽和食鹽水

    5.市售大豆油

四、實驗步驟

（一）樣品預處理

甲酯化：

    取2~4滴大豆油樣品于xml的圓底燒瓶中，加入3ml的KOH甲醇溶液，70℃水浴加熱回流5min；取出冷卻至室溫（可用水冷），加入5ml三氟化硼溶液，70℃水浴加熱回流5min；取出冷卻至室溫，加入3ml正己烷，70℃水浴加熱回流5min；取出冷卻至室溫，加入適量飽和食鹽水溶液，靜止3~5min，取上層油樣1ml于試樣瓶中，進GC分析。 

測定：

（1）氣相色譜條件

    ①色譜柱：石英彈性毛細管柱，0.25mm（內徑）×60m，內膜厚度0.32。

    ②程序升溫： 150℃保持3min，5℃/min升溫至220℃，保持10min；進樣口溫度250℃；檢測器溫度300℃。

    ③氣體流速：氮氣：40mL/min，氫氣：40mL/min，空氣：450mL/min，分流比30﹕1。

    ④柱前壓：25kpa

（2）色譜分析

    自動進樣，吸取1μL試樣液注入氣相色譜儀，記錄色譜峰的保留時間和峰高。利用標準圖譜確定每個色譜峰的性質（定性），利用軟件自帶的自動積分方法計算各脂肪酸組分的百分含量。

五、注意事項

1．本法檢測靈敏度高，在分析時應注意防止由于色譜柱中高沸點固定液、樣品凈化不完全及載氣不純等帶來的污染，使其靈敏度下降。

2．本方法采用極性色譜柱，樣品處理時應盡力保證脫水徹底。

3．本實驗采用自動進樣，序列采集，工作站在序列運行之后不再允許更改序列采集方法，所以在運行某一序列之前應確認程序編輯無誤。

4．為了保護毛細管柱，一定要確認升溫程序在該型號色譜柱的溫度允許范圍內。